-
اصول کلی تهیه محیط های کشت
همان طور که مستحضر هستید در مقاله های قبل به بحث کلی محیط کشت ، انواع محیط کشت و کاربرد آنها در زمینه پزشکی و صنایع مختلف اشاره کردیم که در صورت نیاز می توانید با مراجعه به مقاله "معرفی انواع محیط کشت و کاربرد آنها" از اطلاعات کافی برخوردار شوید و نظرات ارزشمندتان را با ما به اشتراک بگذارید.
اما در این مقاله به نحوه تهیه محیط کشت جامد و مایع و آگار می پردازیم.
-
طزر تهیه محیط کشت جامد
پلیت های آگاردار، شامل محیط کشت های جامد برای رشد میکروارگانیسم ها هستند. محیط رشد میکروبی حاوی مواد مغذی و منبع انرژی برای مصرف میکروب ها در هنگام رشد است و آگار محیط را در حالت نیمه جامد و ژل مانند نگه می دارد.
در محیط کشت جامد، یک میکروب منفرد رشد کرده و تقسیم می شود تا یک “کلنی”، متشکل از باکتری های یکسان تولید کند. انواع مختلف میکروب ها کلونی هایی با خصوصیات مختلف تولید می کنند، شکل، رنگ و بافت متفاوت دارند که به میکروب شناسان کمک می کند خالص بودن یک کشت را تشخیص دهند یا انواع میکروب ها را در یک نمونه مخلوط شناسایی کنند.
تعدادی از شرکت های بیولوژیک پلیت محیط کشت جامد از پیش ساخته شده را به فروش می رسانند اما محیطی که خودتان تهیه کنید بسیار ارزانتر است.
با کمی تمرین خواهید فهمید که تهیه پلیت های شخصی بسیار آسان است و انعطاف پذیری بیشتری نیز خواهید داشت که می توانید دستورالعمل ها را متناسب با نیازهای خود شخصی سازی کنید.
نکته: میکروبیولوژیست ها معمولاً از پلیت های استریل و یکبار مصرف پلی استایرن استفاده می کنند، اما می توانید از ظروف شیشه ای پتری یا حتی شیشه های غذای کودک نیز استفاده کنید. اگر از ظروف شیشه ای یا شیشه استفاده می کنید، استریل کردن محیط کشت مستقیم در آنها آسان تر است.
محیط را طبق مرحله 3 آماده کنید، اما به جای استریل کردن، آن را بجوشانید تا زمانی که آگار حل شود، سپس در ظرف های جداگانه بریزید. محیط موجود در ظروف را در اتوکلاو استریل کنید.
۱. انتخاب دستورالعمل تهیه محیط کشت جامد
تصمیم بگیرید که به چند پلیت برای تهیه محیط کشت جامد نیاز دارید. دستورالعمل ها معمولا یک لیتر (1000 میلی لیتر) محیط کشت است، که برای پر کردن تقریباً چهل پلیت 100 میلی متری کافی است، اما در صورت لزوم می توان آنها را کم یا زیاد کرد.
حدود 25 میلی لیتر محیط کشت آگار در هر پلیت 100 میلی متری ریخته می شود.
۲. آماده کردن مواد مورد استفاده در تهیه محیط کشت جامد
مواد تشکیل دهنده دستور العمل محیط کشت جامد
• ظروف استریل پلی استایرن، پتری. 100*15 میلی متر متداول ترین اندازه است، اما اندازه های 60 و 80 میلی متر نیز استفاده میشود.
• ظرف شیشه ای که حداقل دو برابر حجم محیط کشت شما را در خود نگه می دارد.
• فویل آلومینیومی برای پوشاندن محفظه محیط کشت و یا بسته بندی پلاستیکی اگر از مایکروویو استفاده می کنید.
• اتوکلاو، زودپز، مایکروویو یا صفحه داغ برای استریل کردن محیط کشت.
• دستکش مقاوم در برابر حرارت نگه داری ظرف های گرم.
• الکل ۷۰ درصد، تمیز کننده خانگی ، 10٪ وایتکس، یا دستمال مرطوب ضد عفونی کننده برای تمیز کردن محل کار.
• استوانه مدرج برای اندازه گیری آب.
• ترازو برای توزین مواد جامد.
• ابزارهایی برای برداشتن مواد جامد (مانند قاشق ها و ماسوره یا بشقاب و قاشق های کاغذی).
۳. آماده سازی محیط کشت جامد
از یک ظرف شیشه ای (در حالت ایده آل یک ارلن مایر) استفاده کنید که حداقل دو برابر حجم محیط کشت شما را در خود نگه دارد.
1. مواد را طبق دستورالعمل انتخابی خود جمع کنید.
2. اگر از مایکروویو استفاده می کنید، آن را با فویل آلومینیوم یا پلاستیک بپوشانید.
نکته: روی جعبه های پودر آماده معمولا میزانی که باید در یک لیتر حل شود، نوشته شده است. شما میتوانید بسته به میزانی که نیاز دارید تهیه کنید تناسب بسته و مقداری از پودر که لازم دارید را وزن کنید، در ارلن ریخته و سپس در آب مقطر حل کنید.
۴. استریل کردن محیط کشت آگار دار
یکی از مزایای محیط های پر نمک این است که میکروب های معمولی آلوده بر روی آن رشد نخواهند کرد، بنابراین محیط هایی با غلظت نمک حداقل 10٪ می توانند با جوشاندن استریل شوند.
اطمینان حاصل کنید که آگار کاملاً حل شده است. در محیط های حاوی 15٪ یا بیشتر نمک، آگار ممکن است به سرعت حل شود اما معمولا محیط کشت ابری به نظر می رسد، یا ممکن است اجسام کوچک و شفاف در آن شناور دیده شود. جوشاندن را ادامه دهید تا محیط کشت کاملاً شفاف شود. این مرحله معمولا بیش از 15 دقیقه طول می کشد. آگار ناقص حل شده محیط کشت شما را شکننده و کدر می کند.
۵. ریختن محیط کشت آگار دار به درون پلیت
1. یک محل کار مناسب آماده کنید.
2. بر روی پلیت ها نام محیط کشت، تاریخ و نام خودتان را بنویسید.
3. محیط کشت های داغ را به شدت بچرخانید تا مخلوط شوند.
4. محیط را تا حدی که برای نگه داشتن آن خنک شود، حدود 20-30 دقیقه درون بن ماری 50 درجه انکوبه کنید. اگر محیط کشت آگار خیلی خنک باشد، شروع به جامد شدن در ظرف می کند. اگر بیش از حد گرم باشد ، باعث میعان بیش از حد به درب ها می شود.
5. دوباره محیط کشت را بچرخانید تا درست قبل از ریختن مخلوط شود. مراقب باشید حباب وارد نکنید.
6. محیط را درون پلیت بریزید تا تقریباً 25 میلی لیتر را بپوشاند (به فیلم بالا مراجعه کنید).
7. بعد از چند ساعت، پلیت ها را درون یک کیسه پلاستیکی قرار دهید. کیسه را با نوع محیط کشت و تاریخ برچسب بزنید و وارونه در یخچال نگه دارید.
نکته: اگر زمان زیادی ندارید، می توانید محیط جامد درون بطری ها را تهیه کنید، آن را استریل کنید و بگذارید کاملا در بطری سرد شود. بعداً می توانید محیط را در وان آب گرم یا مایکروویو گرم کنید تا ذوب شود. بگذارید تا خنک شود تا لمس آن راحت شود، سپس آن را درون پلیت ها بریزید.
-
اصول کلی تهیه محیط های کشت
همان طور که مستحضر هستید در مقاله های قبل به بحث کلی محیط کشت ، انواع محیط کشت و کاربرد آنها در زمینه پزشکی و صنایع مختلف اشاره کردیم که در صورت نیاز می توانید با مراجعه به مقاله "معرفی انواع محیط کشت و کاربرد آنها" از اطلاعات کافی برخوردار شوید و نظرات ارزشمندتان را با ما به اشتراک بگذارید.
اما در این مقاله به نحوه تهیه محیط کشت جامد و مایع و آگار می پردازیم.
-
طزر تهیه محیط کشت جامد
پلیت های آگاردار، شامل محیط کشت های جامد برای رشد میکروارگانیسم ها هستند. محیط رشد میکروبی حاوی مواد مغذی و منبع انرژی برای مصرف میکروب ها در هنگام رشد است و آگار محیط را در حالت نیمه جامد و ژل مانند نگه می دارد.
در محیط کشت جامد، یک میکروب منفرد رشد کرده و تقسیم می شود تا یک “کلنی”، متشکل از باکتری های یکسان تولید کند. انواع مختلف میکروب ها کلونی هایی با خصوصیات مختلف تولید می کنند، شکل، رنگ و بافت متفاوت دارند که به میکروب شناسان کمک می کند خالص بودن یک کشت را تشخیص دهند یا انواع میکروب ها را در یک نمونه مخلوط شناسایی کنند.
تعدادی از شرکت های بیولوژیک پلیت محیط کشت جامد از پیش ساخته شده را به فروش می رسانند اما محیطی که خودتان تهیه کنید بسیار ارزانتر است.
با کمی تمرین خواهید فهمید که تهیه پلیت های شخصی بسیار آسان است و انعطاف پذیری بیشتری نیز خواهید داشت که می توانید دستورالعمل ها را متناسب با نیازهای خود شخصی سازی کنید.
نکته: میکروبیولوژیست ها معمولاً از پلیت های استریل و یکبار مصرف پلی استایرن استفاده می کنند، اما می توانید از ظروف شیشه ای پتری یا حتی شیشه های غذای کودک نیز استفاده کنید. اگر از ظروف شیشه ای یا شیشه استفاده می کنید، استریل کردن محیط کشت مستقیم در آنها آسان تر است.
محیط را طبق مرحله 3 آماده کنید، اما به جای استریل کردن، آن را بجوشانید تا زمانی که آگار حل شود، سپس در ظرف های جداگانه بریزید. محیط موجود در ظروف را در اتوکلاو استریل کنید.
۱. انتخاب دستورالعمل تهیه محیط کشت جامد
تصمیم بگیرید که به چند پلیت برای تهیه محیط کشت جامد نیاز دارید. دستورالعمل ها معمولا یک لیتر (1000 میلی لیتر) محیط کشت است، که برای پر کردن تقریباً چهل پلیت 100 میلی متری کافی است، اما در صورت لزوم می توان آنها را کم یا زیاد کرد.
حدود 25 میلی لیتر محیط کشت آگار در هر پلیت 100 میلی متری ریخته می شود.
۲. آماده کردن مواد مورد استفاده در تهیه محیط کشت جامد
مواد تشکیل دهنده دستور العمل محیط کشت جامد
• ظروف استریل پلی استایرن، پتری. 100*15 میلی متر متداول ترین اندازه است، اما اندازه های 60 و 80 میلی متر نیز استفاده میشود.
• ظرف شیشه ای که حداقل دو برابر حجم محیط کشت شما را در خود نگه می دارد.
• فویل آلومینیومی برای پوشاندن محفظه محیط کشت و یا بسته بندی پلاستیکی اگر از مایکروویو استفاده می کنید.
• اتوکلاو، زودپز، مایکروویو یا صفحه داغ برای استریل کردن محیط کشت.
• دستکش مقاوم در برابر حرارت نگه داری ظرف های گرم.
• الکل ۷۰ درصد، تمیز کننده خانگی ، 10٪ وایتکس، یا دستمال مرطوب ضد عفونی کننده برای تمیز کردن محل کار.
• استوانه مدرج برای اندازه گیری آب.
• ترازو برای توزین مواد جامد.
• ابزارهایی برای برداشتن مواد جامد (مانند قاشق ها و ماسوره یا بشقاب و قاشق های کاغذی).
۳. آماده سازی محیط کشت جامد
از یک ظرف شیشه ای (در حالت ایده آل یک ارلن مایر) استفاده کنید که حداقل دو برابر حجم محیط کشت شما را در خود نگه دارد.
1. مواد را طبق دستورالعمل انتخابی خود جمع کنید.
2. اگر از مایکروویو استفاده می کنید، آن را با فویل آلومینیوم یا پلاستیک بپوشانید.
نکته: روی جعبه های پودر آماده معمولا میزانی که باید در یک لیتر حل شود، نوشته شده است. شما میتوانید بسته به میزانی که نیاز دارید تهیه کنید تناسب بسته و مقداری از پودر که لازم دارید را وزن کنید، در ارلن ریخته و سپس در آب مقطر حل کنید.
۴. استریل کردن محیط کشت آگار دار
یکی از مزایای محیط های پر نمک این است که میکروب های معمولی آلوده بر روی آن رشد نخواهند کرد، بنابراین محیط هایی با غلظت نمک حداقل 10٪ می توانند با جوشاندن استریل شوند.
اطمینان حاصل کنید که آگار کاملاً حل شده است. در محیط های حاوی 15٪ یا بیشتر نمک، آگار ممکن است به سرعت حل شود اما معمولا محیط کشت ابری به نظر می رسد، یا ممکن است اجسام کوچک و شفاف در آن شناور دیده شود. جوشاندن را ادامه دهید تا محیط کشت کاملاً شفاف شود. این مرحله معمولا بیش از 15 دقیقه طول می کشد. آگار ناقص حل شده محیط کشت شما را شکننده و کدر می کند.
۵. ریختن محیط کشت آگار دار به درون پلیت
1. یک محل کار مناسب آماده کنید.
2. بر روی پلیت ها نام محیط کشت، تاریخ و نام خودتان را بنویسید.
3. محیط کشت های داغ را به شدت بچرخانید تا مخلوط شوند.
4. محیط را تا حدی که برای نگه داشتن آن خنک شود، حدود 20-30 دقیقه درون بن ماری 50 درجه انکوبه کنید. اگر محیط کشت آگار خیلی خنک باشد، شروع به جامد شدن در ظرف می کند. اگر بیش از حد گرم باشد ، باعث میعان بیش از حد به درب ها می شود.
5. دوباره محیط کشت را بچرخانید تا درست قبل از ریختن مخلوط شود. مراقب باشید حباب وارد نکنید.
6. محیط را درون پلیت بریزید تا تقریباً 25 میلی لیتر را بپوشاند (به فیلم بالا مراجعه کنید).
7. بعد از چند ساعت، پلیت ها را درون یک کیسه پلاستیکی قرار دهید. کیسه را با نوع محیط کشت و تاریخ برچسب بزنید و وارونه در یخچال نگه دارید.
نکته: اگر زمان زیادی ندارید، می توانید محیط جامد درون بطری ها را تهیه کنید، آن را استریل کنید و بگذارید کاملا در بطری سرد شود. بعداً می توانید محیط را در وان آب گرم یا مایکروویو گرم کنید تا ذوب شود. بگذارید تا خنک شود تا لمس آن راحت شود، سپس آن را درون پلیت ها بریزید.
خرید محیط کشت های جامد
مشاهده همهخرید محیط کشت های جامد
مشاهده همه-
چگونه محیط های کشت مایع درست کنیم؟
راز رشد قارچ های فراوان را با دستور العمل کشت محیط مایع قارچی ساده و آسان کشف کنید. هنر ساخت محیط کشت مایع را کشف کنید و بازی پرورش قارچ خود را به سطح بعدی ببرید!
محیط کشت مایع چیست؟
محیط کشت مایع به عنوان کشت اولیه قارچ استفاده می شود. از آن برای تلقیح صفحات آگار، دانه های استریل شده برای تولید تخم ریزی یا برای گسترش و ایجاد کشت مایع بیشتر استفاده می شود.
محیط کشت مایع اغلب در شیشه هایی با درب های اصلاح شده از یک آبگوشت استریل شده حاوی نسبت خاصی از شکر به آب تولید می شود. این آبگوشت با کشت میسلیوم تلقیح می شود. میسلیوم قند را مصرف می کند و به رشد خود ادامه می دهد و تقریباً مقادیر بی نهایت میسلیوم تولید می کند.
از شیشه با یک سرنگ از طریق درگاه تزریق در درب اصلاح شده استخراج می شود. برای جلوگیری از انتقال آلاینده ها می توان نقطه سوزن سرنگ را با حرارت استریل کرد
نحوه استفاده از محیط کشت مایع
محیط کشت مایع یک روش متداول در پرورش قارچ برای تکثیر و رشد مقادیر زیادی میسلیوم قارچ است. این شامل رشد میسلیوم در یک محلول مایع غنی از مواد مغذی، معمولا در یک شیشه یا بطری استریل شده است. کشت مایع به عنوان محیطی برای رشد و گسترش میسلیوم عمل می کند و مواد مغذی و منابع لازم را برای رشد قارچ فراهم می کند.
هنگامی که میسلیوم در کشت مایع مستعمره شد، می توان از آن برای تلقیح بسترهایی مانند دانه یا خاک اره استفاده کرد که به عنوان محیط رشد نهایی قارچ ها عمل می کند. کشت مایع همچنین پرورش دهنده را قادر می سازد تا به سرعت و به آسانی مقادیر زیادی از میسلیوم را تکثیر کند و آن را راهی مناسب و موثر برای تکثیر قارچ می کند.
کشت مایع با ارائه روشی مناسب و کارآمد برای تکثیر و رشد میسلیوم که برای تولید محصولات سالم و زنده قارچ ضروری است، نقش مهمی در رشد قارچ ایفا می کند.
-
طرز تهیه محیط کشت مایع
بر اساس روش چاپ شده روی ظرف محیط کشت مقدار معینی از پودر آماده را بر حسب حجم مورد نیاز آب مقطر حل کرده و در یک ارلن با حجم متناسب نیاز خود بریزید (مثلا اگر برای یک هفته کاری تعداد ۲۰ عدد محیط کشت که حدودا هر کدام ۴ سی سی محیط کشت داشته باشند لازم دارید ارلن ۱۰۰۰cc مناسب کار شما می باشد.) بعضی از محیط های کشت قبل از اتوکلاو کردن نیازمند جوشاندن هستند که البته این مورد هم روی برگه ی بسته بندی محیط کشت نوشته شده است در اینجا باید توجه کنیم که بعد از اضافه کردن پودر محیط کشت روی آب مقطر داخل ارلن باید روی شعله ارلن را تکان دهیم تا محیط کشت خوب حل شود و به صورت لخته لخته باقی نماند.
اصولا بعد از جوشاندن رنگ محیط کشت روشن و شفاف تر می شود بعد از جوشاندن باید برای استریل شدن اتوکلاو شوند که طبق دستور محیط های کشت را اصولا برای ۱۵ دقیقه در دمای ۱۲۱ درجه و فشار اتمسفر ۱۵LB باید اتوکلاو کنیم. بعد از اتوکلاو محلول محیط های کشت را به لوله های سرولوژی ۱۰*۱۳ انتقال می دهیم لوله های حاوی محیط کشت استریل را می توان مدتی در یخچال نگهداری کرد.
-
برخی از رایجترین انواع محیط مایع
۱. محیط کشت مایع نوترینت براث (Nutrient Broth)
نوترینت براث یکی از رایجترین انواع محیط کشت مایع در آزمایشگاه است. این محیط کشت در بسیاری از روش های استاندارد تجزیه و تحلیل غذاها، محصولات لبنی و آب توصیه میشود.
Nutrient Broth همان فرمولاسیون Nutrient Agar را دارد. فقط آگار حذف شده است. این ماده از مخلوط تریپتون و عصاره گوشت ساخته شده است که به رشد میکروارگانیسمها کمک میکند. کلرید سدیم نیز برای حفظ فشار اسمزی در ترکیبات این محیط کشت وجود دارد.
نوترینت براث را می توان با مواد دیگری مانند خون، سرم، قندها و غیره برای اهداف خاص غنی کرد.
۲. آبگوشت دکستروز آزید (Azide Dextrose Broth)
آبگوشت دکستروز آزید، یک محیط انتخابی است که برای تعیین کمیت انتروکوکها در آب، غذا و سایر مواد مشکوک به آلودگی با فاضلاب استفاده میشود. وجود انتروکوک به عنوان شاخص آلودگی مدفوع استفاده میشود.
این محیط کشت مایع حاوی مخلوطی از پپتون و گلوکز است. این مواد آزید دکستروز را بسیار مغذی میکنند. کلرید سدیم نیز تعادل اسمزی را حفظ میکند. گزینش پذیری در برابر ارگانیسمهای گرم منفی نیز توسط سدیم آزید ایجاد میشود. بافر فسفات موجود در دکستروز آزید، به کنترل pH کمک میکند.
۳. محیط کشت مایع (LB broth)
محیط کشت LB برای کشت غیرانتخابی سویههای E. coli ، تولید پلاسمید DNA و تولید پروتئین نوترکیب مناسب است.
فرمول محیط LB در سال ۱۹۵۱ در اولین مقاله Bertani منتشر شد. ۱ لیتر از این محیط کشت مایع، شامل ۱۰ گرم تریپتون، ۵ گرم عصاره مخمر و ۱۰ گرم کلرید سدیم است.
۴. محیط کشت براث تیوگلیکولات (Thioglycolate broth)
محیط کشت تایو براث یک محیط همه منظوره برای کشت بی هوازی، میکروآئروفیل و هوازی است. محیط کشت تیوگلیکولات براث برای تعیین نیاز اکسیژن میکروارگانیسمها استفاده میشود. به این معنا که میتوان از روی ویژگیهای مختلف باکتریها در این محیط کشت، هوازی یا بیهوازی بودن آنها را مشخص کرد.
-
چگونه محیط های کشت مایع درست کنیم؟
راز رشد قارچ های فراوان را با دستور العمل کشت محیط مایع قارچی ساده و آسان کشف کنید. هنر ساخت محیط کشت مایع را کشف کنید و بازی پرورش قارچ خود را به سطح بعدی ببرید!
محیط کشت مایع چیست؟
محیط کشت مایع به عنوان کشت اولیه قارچ استفاده می شود. از آن برای تلقیح صفحات آگار، دانه های استریل شده برای تولید تخم ریزی یا برای گسترش و ایجاد کشت مایع بیشتر استفاده می شود.
محیط کشت مایع اغلب در شیشه هایی با درب های اصلاح شده از یک آبگوشت استریل شده حاوی نسبت خاصی از شکر به آب تولید می شود. این آبگوشت با کشت میسلیوم تلقیح می شود. میسلیوم قند را مصرف می کند و به رشد خود ادامه می دهد و تقریباً مقادیر بی نهایت میسلیوم تولید می کند.
از شیشه با یک سرنگ از طریق درگاه تزریق در درب اصلاح شده استخراج می شود. برای جلوگیری از انتقال آلاینده ها می توان نقطه سوزن سرنگ را با حرارت استریل کرد
نحوه استفاده از محیط کشت مایع
محیط کشت مایع یک روش متداول در پرورش قارچ برای تکثیر و رشد مقادیر زیادی میسلیوم قارچ است. این شامل رشد میسلیوم در یک محلول مایع غنی از مواد مغذی، معمولا در یک شیشه یا بطری استریل شده است. کشت مایع به عنوان محیطی برای رشد و گسترش میسلیوم عمل می کند و مواد مغذی و منابع لازم را برای رشد قارچ فراهم می کند.
هنگامی که میسلیوم در کشت مایع مستعمره شد، می توان از آن برای تلقیح بسترهایی مانند دانه یا خاک اره استفاده کرد که به عنوان محیط رشد نهایی قارچ ها عمل می کند. کشت مایع همچنین پرورش دهنده را قادر می سازد تا به سرعت و به آسانی مقادیر زیادی از میسلیوم را تکثیر کند و آن را راهی مناسب و موثر برای تکثیر قارچ می کند.
کشت مایع با ارائه روشی مناسب و کارآمد برای تکثیر و رشد میسلیوم که برای تولید محصولات سالم و زنده قارچ ضروری است، نقش مهمی در رشد قارچ ایفا می کند.
-
طرز تهیه محیط کشت مایع
بر اساس روش چاپ شده روی ظرف محیط کشت مقدار معینی از پودر آماده را بر حسب حجم مورد نیاز آب مقطر حل کرده و در یک ارلن با حجم متناسب نیاز خود بریزید (مثلا اگر برای یک هفته کاری تعداد ۲۰ عدد محیط کشت که حدودا هر کدام ۴ سی سی محیط کشت داشته باشند لازم دارید ارلن ۱۰۰۰cc مناسب کار شما می باشد.) بعضی از محیط های کشت قبل از اتوکلاو کردن نیازمند جوشاندن هستند که البته این مورد هم روی برگه ی بسته بندی محیط کشت نوشته شده است در اینجا باید توجه کنیم که بعد از اضافه کردن پودر محیط کشت روی آب مقطر داخل ارلن باید روی شعله ارلن را تکان دهیم تا محیط کشت خوب حل شود و به صورت لخته لخته باقی نماند.
اصولا بعد از جوشاندن رنگ محیط کشت روشن و شفاف تر می شود بعد از جوشاندن باید برای استریل شدن اتوکلاو شوند که طبق دستور محیط های کشت را اصولا برای ۱۵ دقیقه در دمای ۱۲۱ درجه و فشار اتمسفر ۱۵LB باید اتوکلاو کنیم. بعد از اتوکلاو محلول محیط های کشت را به لوله های سرولوژی ۱۰*۱۳ انتقال می دهیم لوله های حاوی محیط کشت استریل را می توان مدتی در یخچال نگهداری کرد.
-
برخی از رایجترین انواع محیط مایع
۱. محیط کشت مایع نوترینت براث (Nutrient Broth)
نوترینت براث یکی از رایجترین انواع محیط کشت مایع در آزمایشگاه است. این محیط کشت در بسیاری از روش های استاندارد تجزیه و تحلیل غذاها، محصولات لبنی و آب توصیه میشود.
Nutrient Broth همان فرمولاسیون Nutrient Agar را دارد. فقط آگار حذف شده است. این ماده از مخلوط تریپتون و عصاره گوشت ساخته شده است که به رشد میکروارگانیسمها کمک میکند. کلرید سدیم نیز برای حفظ فشار اسمزی در ترکیبات این محیط کشت وجود دارد.
نوترینت براث را می توان با مواد دیگری مانند خون، سرم، قندها و غیره برای اهداف خاص غنی کرد.
۲. آبگوشت دکستروز آزید (Azide Dextrose Broth)
آبگوشت دکستروز آزید، یک محیط انتخابی است که برای تعیین کمیت انتروکوکها در آب، غذا و سایر مواد مشکوک به آلودگی با فاضلاب استفاده میشود. وجود انتروکوک به عنوان شاخص آلودگی مدفوع استفاده میشود.
این محیط کشت مایع حاوی مخلوطی از پپتون و گلوکز است. این مواد آزید دکستروز را بسیار مغذی میکنند. کلرید سدیم نیز تعادل اسمزی را حفظ میکند. گزینش پذیری در برابر ارگانیسمهای گرم منفی نیز توسط سدیم آزید ایجاد میشود. بافر فسفات موجود در دکستروز آزید، به کنترل pH کمک میکند.
۳. محیط کشت مایع (LB broth)
محیط کشت LB برای کشت غیرانتخابی سویههای E. coli ، تولید پلاسمید DNA و تولید پروتئین نوترکیب مناسب است.
فرمول محیط LB در سال ۱۹۵۱ در اولین مقاله Bertani منتشر شد. ۱ لیتر از این محیط کشت مایع، شامل ۱۰ گرم تریپتون، ۵ گرم عصاره مخمر و ۱۰ گرم کلرید سدیم است.
۴. محیط کشت براث تیوگلیکولات (Thioglycolate broth)
محیط کشت تایو براث یک محیط همه منظوره برای کشت بی هوازی، میکروآئروفیل و هوازی است. محیط کشت تیوگلیکولات براث برای تعیین نیاز اکسیژن میکروارگانیسمها استفاده میشود. به این معنا که میتوان از روی ویژگیهای مختلف باکتریها در این محیط کشت، هوازی یا بیهوازی بودن آنها را مشخص کرد.