کیت الایزای ویتامین B12 کلبیوتک
معرفی کیت الایزای ویتامین B12 کلبیوتک
کیت الایزای ویتامین B12 شرکت کالبیوتک (Calbiotech) – ساخت آمریکا – یک سامانه دقیق و سریع برای سنجش کمی ویتامین B12 در نمونههای سرم و پلاسمای انسان است. این کیت با بهرهگیری از فناوری پیشرفته الایزای رقابتی تأخیری (Delayed Competitive Binding)، نتایج قابل اعتمادی را برای محققان و متخصصان علوم پزشکی و تغذیه فراهم میآورد.
کل زمان انجام آزمایش تنها ۱.۵ ساعت است که آن را به گزینهای ایدهآل برای پروژههای تحقیقاتی با گردش کاری فشرده تبدیل کرده است. کیت شامل ۶ سطح استاندارد آماده (از صفر تا ۲۰۰۰ pg/ml) بوده و تمام معرفهای ضروری به جز تجهیزات عمومی آزمایشگاه در آن تعبیه شده است.
این محصول برای تحقیق در زمینه کمبود ویتامین B12، اختلالات خونی، بیماریهای عصبی و مطالعات تغذیهای کاربرد دارد. نمونهها تا دو هفته در یخچال (۲ تا ۸ درجه) و در صورت نیاز برای مدت طولانیتر در فریزر (۲۰- درجه) قابل نگهداری هستند.
با ۹۶ تست در هر کیت، کیفیت ساخت آمریکا و دقت بالا، کیت الایزای ویتامین B12 کالبیوتک انتخابی مطمئن برای آزمایشگاههای تحقیقاتی است.
اصل آزمایش
کیت تست B12 یک ایمونواسی آنزیمی فاز جامد (ELISA) است که بر اساس اصل رقابت تأخیری کار میکند. چاهکهای پوششداده شده با استرپتاویدین به همراه استانداردهای ویتامین B12 استخراجشده، کنترلها، نمونهها و کونژوگه فاکتور داخلی-بیوتین به مدت ۴۵ دقیقه در دمای اتاق انکوبه میشوند. در طول انکوباسیون، فاکتور داخلی نشانهدار شده با بیوتین به ویتامین B12 موجود در نمونه، استاندارد یا سرم کنترل متصل میشود. پس از ۴۵ دقیقه انکوباسیون، کونژوگه ویتامین B12-آنزیم اضافه میشود که برای مدت ۳۰ دقیقه دیگر با ویتامین B12 نمونه، استاندارد یا سرم کنترل برای مکانهای باقیمانده روی فاکتور داخلی رقابت میکند. سپس تمام کونژوگههای متصل نشده حذف شده و چاهکها شسته میشوند. در مرحله بعد، محلول معرف TMB اضافه شده و به مدت ۱۵ دقیقه در دمای اتاق انکوبه میشود که منجر به ایجاد رنگ آبی میگردد. ایجاد رنگ با افزودن محلول توقف متوقف میشود و جذب نوری در طول موج ۴۵۰ نانومتر با اسپکتروفتومتر اندازهگیری میگردد. منحنی استاندارد با رسم غلظت استاندارد در برابر جذب نوری به دست میآید. شدت رنگ با مقدار ویتامین B12 در نمونه رابطه معکوس دارد. کل زمان انجام روش آزمایش ۱.۵ ساعت است.
| مواد ارائه شده | ۹۶ تست |
|---|---|
| ۱. صفحه میکروول پوششداده شده با استرپتاویدین | ۱۲×۸×۱ |
| ۲. مجموعه استاندارد ویتامین B12: ۶ ویال (آماده مصرف) | ۰.۵ میلیلیتر |
| ۳. معرف فاکتور داخلی بیوتینه شده، ۱ بطری (آماده مصرف) | ۷ میلیلیتر |
| ۴. کونژوگه آنزیمی B12، ۱ بطری (آماده مصرف) | ۷ میلیلیتر |
| ۵. بافر استخراج، ۱ بطری (آماده مصرف) | ۸ میلیلیتر |
| ۶. بافر خنثیسازی، ۱ بطری (آماده مصرف) | ۸ میلیلیتر |
| ۷. محلول TCEP، ۱ بطری (۴۰ برابر) | ۰.۲۵ میلیلیتر |
| ۸. محلول توقف، ۱ بطری (آماده مصرف) | ۱۲ میلیلیتر |
| ۹. سوبسترای TMB، ۱ بطری (آماده مصرف) | ۱۲ میلیلیتر |
| ۱۰. کنسانتره شستشو ۲۰ برابر، ۱ بطری | ۲۵ میلیلیتر |
مواد ارائه نشده
۱. پیپتهای دقیق
۲. نوک پیپت یکبار مصرف
۳. دستگاه خواننده الایزا با قابلیت خواندن جذب نوری در ۴۵۰ نانومتر
۴. ورتکس میکسر با سر تخت
۵. شیکر صفحه
۶. لوله آزمایش برای آمادهسازی نمونه
===== صفحه ۲ =====
هشدارها و احتیاطها
۱. مواد بالقوه زیستخطر: استانداردها حاوی اجزای انسانی هستند که با معرفهای دارای مجوز FDA از نظر آنتیژن سطحی هپاتیت B و آنتیبادی HIV غیرواکنشی tested شدهاند. با این حال، از آنجا که هیچ روش آزمایشی نمیتواند اطمینان کامل از عدم وجود HIV، ویروس هپاتیت B یا سایر عوامل عفونی بدهد، این معرفها باید در سطح ایمنی زیستی ۲، طبق توصیه دفترچه راهنمای مراکز کنترل و پیشگیری از بیماریها/مؤسسات ملی سلامت، با عنوان "ایمنی زیستی در آزمایشگاههای میکروبیولوژی و پزشکی" (۱۹۸۴)، جابجا شوند.
۲. این کیت فقط برای مصارف تحقیقاتی در نظر گرفته شده است. قابل استفاده در روشهای تشخیصی نیست.
۳. با دهان پیپت نکنید. در مناطقی که نمونهها یا معرفهای کیت جابجا میشوند، سیگار نکشید، غذا نخورید و ننوشید.
۴. اجزای این کیت به عنوان یک واحد یکپارچه در نظر گرفته شدهاند. اجزای لاتهای مختلف را نباید با هم مخلوط کرد.
۵. اجزای این کیت را از نور و تماس طولانی با هوا محافظت کنید.
۶. توصیه میشود استانداردها، کنترلها و نمونههای سرم به صورت تکراری (دو تا) انجام شوند.
۷. نتایج مطلوب با پایبندی دقیق به این پروتکل حاصل میشود. پیپتکاری دقیق و صحیح و همچنین رعایت دقیق زمان و دمای تجویز شده ضروری است. هرگونه انحراف از این موارد ممکن است منجر به دادههای نامعتبر شود.
جمعآوری و نگهداری نمونه
از نمونههای سرم، پلاسمای هپارینه یا پلاسمای EDTA میتوان برای آزمایش استفاده کرد.
برای سرم، خون کامل را با خونگیری از ورید جمعآوری کرده و اجازه دهید لخته شود. برای پلاسما، نمونه را قبل از سانتریفیوژ به آرامی با وارونه کردن مخلوط کنید. در اسرع وقت پس از جمعآوری، سانتریفیوژ کرده و سرم یا پلاسما را جدا کنید. از نمونههای همولیز (شکسته شدن گلبولهای قرمز) استفاده نکنید. نمونهها ممکن است به مدت دو هفته در یخچال (۲ تا ۸ درجه سانتیگراد) نگهداری شوند. برای نگهداری طولانیمدت، میتوان آنها را در ۲۰- درجه سانتیگراد نگهداری کرد. از چرخههای مکرر انجماد و ذوب خودداری کنید. اجازه دهید نمونههای یخچالی یا منجمد-ذوب شده به مدت ۳۰ دقیقه قبل از استفاده به دمای اتاق برسند؛ نمونهها باید قبل از تجزیه و تحلیل مخلوط شوند.
آمادهسازی معرفها
قبل از انجام آزمایش، موارد زیر را آماده کنید:
۱. عامل استخراج:
بلافاصله قبل از استفاده، یک قسمتی از محلول TCEP را با نسبت ۱:۴۰ با بافر استخراج رقیق کنید. به عنوان مثال، برای تهیه ۱ میلیلیتر عامل استخراج، ۲۵ میکرولیتر محلول TCEP را به ۹۷۵ میکرولیتر بافر استخراج اضافه کنید.
۲. استخراج نمونه:
به تعداد لازم برای هر یک از استانداردها، نمونهها و کنترلها لوله آزمایش برچسب بزنید. ۵۰ میکرولیتر از هر نمونه مورد آزمایش را به لولههای جداگانه اضافه کنید. پس از اضافه شدن همه نمونهها، ۲۵ میکرولیتر معرف استخراج به هر نمونه اضافه کنید. پس از هر بار افزودن، لوله آزمایش را ورتکس کنید. اجازه دهید استخراج به مدت ۱۵ دقیقه انجام شود. پس از ۱۵ دقیقه، ۲۵ میکرولیتر بافر خنثیسازی به هر نمونه اضافه کنید. پس از هر بار افزودن، لوله آزمایش را ورتکس کنید. اجازه دهید نمونهها به مدت ۵ دقیقه بمانند تا خنثیسازی کامل شود. برای نمونههایی که باید به صورت تکراری (دوتایی) انجام شوند، حجمها را دو برابر کنید.
توجه: زمانهای استخراج یکسان برای نتایج یکنواخت آزمایش حیاتی است.
۳. تهیه بافر شستشوی ۱ برابر: محتویات بطری (۲۵ میلیلیتر، ۲۰ برابر) را به ۴۷۵ میلیلیتر آب مقطر یا دیونیزه اضافه کنید. در دمای اتاق (۲۰-۲۵ درجه سانتیگراد) نگهداری کنید.
روش انجام آزمایش:
همه معرفها و نمونهها باید قبل از استفاده به دمای اتاق برسند. همه معرفها باید به آرامی بدون ایجاد کف مخلوط شوند. پس از شروع روش آزمایش، تمام مراحل باید بدون وقفه انجام شوند.
۱. تعداد نوارهای پوششداده شده مورد نظر را در نگهدارنده قرار دهید.
۲. ۵۰ میکرولیتر از استانداردهای ویتامین B12 استخراجشده، کنترلها و نمونهها را در چاهکهای مناسب بریزید.
۳. ۵۰ میکرولیتر معرف فاکتور داخلی بیوتینه شده را به هر چاهک اضافه کنید. صفحه میکروپلیت را به آرامی به مدت ۲۰-۳۰ ثانیه تکان دهید تا مخلوط شود.
۴. به مدت ۴۵ دقیقه در دمای اتاق (۲۰-۲۵ درجه سانتیگراد) انکوبه کنید.
۵. ۵۰ میکرولیتر کونژوگه آنزیمی را به همه چاهکها اضافه کنید. صفحه میکروپلیت را به آرامی به مدت ۲۰-۳۰ ثانیه تکان دهید تا مخلوط شود.
۶. به مدت ۳۰ دقیقه در دمای اتاق (۲۰-۲۵ درجه سانتیگراد) انکوبه کنید.
۷. محتویات چاهکها را محکم تخلیه کنید. چاهکها را ۳ بار با بافر شستشوی ۱ برابر بشویید. چاهکها را به شدت روی کاغذ جاذب بکوبید تا قطرات آب باقیمانده گرفته شود.
۸. با استفاده از یک پیپت چندکاناله، ۱۰۰ میکرولیتر سوبسترای TMB را به هر چاهک بریزید.
۹. به مدت ۱۵ دقیقه در دمای اتاق (ترجیحاً در تاریکی) انکوبه کنید.
۱۰. ۵۰ میکرولیتر محلول توقف به هر چاهک اضافه کنید و به آرامی مخلوط کنید تا رنگ یکنواختی در هر چاهک حاصل شود.
۱۱. حداکثر ظرف ۱۵ دقیقه پس از افزودن محلول توقف، جذب نوری هر چاهک را در طول موج ۴۵۰ نانومتر بخوانید
منحنی استاندارد:
شش سطح استاندارد برای هر بار اجرا ارائه شده است. یک منحنی استاندارد معمولی در زیر نشان داده شده است.
| ویتامین B12 (pg/ml) | جذب نوری (۴۵۰ نانومتر) |
|---|---|
| ۰ | ۲.۲۹ |
| ۱۰۰ | ۱.۷۸ |
| ۲۵۰ | ۱.۱۹ |
| ۴۰۰ | ۰.۸۷ |
| ۱۰۰۰ | ۰.۳۴ |
| ۲۰۰۰ | ۰.۰۹ |
ویژگیهای کلیدی سنجش سریع و دقیق ویتامین B12 | کیت الایزای رقابتی کالبیوتک:
⏱️ نتیجه در ۱.۵ ساعت – مناسب برای گردش کاری سریع آزمایشگاهی
🎯 دقت بالا با روش رقابتی پیشرفته – طراحی شده برای تحقیقات حساس
📊 شش استاندارد آماده – از صفر تا ۲۰۰۰ pg/ml، بدون نیاز به رقتسازی پیچیده
🧪 مناسب برای سرم و پلاسما – انعطافپذیر در نمونههای انسانی
❄️ نگهداری آسان نمونه – قابل استفاده تا دو هفته در یخچال و مدت طولانیتر در فریزر
🔬 آماده مصرف (به جز تجهیزات عمومی) – کاهش خطا و صرفهجویی در زمان
📦 ۹۶ تست در هر کیت – اقتصادی و بهینه برای پروژههای تحقیقاتی
