معرفی محیط کشت DNase Test Agar ایبرسکو کد i23057
محیط کشت DNase Test Agar ایبرسکو کد i23057 یک محیط کشت افتراقی است که برای شناسایی فعالیت آنزیم DNase یا دئوکسیریبونوکلئاز در میکروارگانیسمها مورد استفاده قرار میگیرد. این محیط بهویژه در شناسایی و افتراق باکتریهای تولیدکننده DNase، از جمله استافیلوکوکهای DNase مثبت، کاربرد دارد و میتواند بهعنوان یکی از آزمونهای تکمیلی در کنار سایر تستهای بیوشیمیایی مانند آزمون کواگولاز استفاده شود.
اساس عملکرد محیط کشت DNase Test Agar بر وجود DNA بهعنوان سوبسترای آنزیم DNase استوار است. میکروارگانیسمهای تولیدکننده آنزیم DNase قادر به هیدرولیز DNA موجود در محیط هستند. پس از رشد میکروارگانیسم و افزودن اسید هیدروکلریک 1 نرمال، DNA هیدرولیزنشده رسوب کرده و محیط کدر میشود؛ درحالیکه در اطراف کلنیهای DNase مثبت، به دلیل تجزیه DNA، هاله شفاف قابل مشاهده خواهد بود.
این محیط کشت علاوه بر شناسایی استافیلوکوکهای DNase مثبت، میتواند در بررسی فعالیت DNase گونههای Serratia نیز کاربرد داشته باشد. استفاده از معرفهایی مانند تولوییدین بلو (Toluidine Blue)، کریستال ویوله یا متیل گرین میتواند بهعنوان روش جایگزین برای آشکارسازی فعالیت DNase و تسریع افتراق برخی گونههای Serratia از باکتریهایی مانند Enterobacter و Klebsiella مورد استفاده قرار گیرد.
فرازمد محیط کشت DNase Test Agar ایبرسکو را برای استفاده در آزمایشگاههای میکروبیولوژی، مراکز تحقیقاتی، دانشگاهها و مجموعههای کنترل کیفیت عرضه میکند. برای خرید محیط کشت DNase Test Agar ایبرسکو، استعلام قیمت محیط کشت DNase، بررسی مشخصات فنی و تهیه سایر محیطهای کشت میکروبی میتوانید از طریق فرازمد اقدام کنید.
ویژگیهای محیط کشت DNase Test Agar ایبرسکو
- محصول برند ایبرسکو (Ibresco)
- کد محصول i23057
- محیط کشت افتراقی برای بررسی فعالیت آنزیم DNase
- مناسب برای شناسایی میکروارگانیسمهای DNase مثبت و DNase منفی
- کاربرد ویژه در شناسایی و افتراق استافیلوکوکهای تولیدکننده DNase
- قابل استفاده بهعنوان آزمون تکمیلی در کنار تست کواگولاز و سایر آزمونهای شناسایی میکروبی
- حاوی DNA بهعنوان سوبسترای اختصاصی برای تشخیص فعالیت آنزیم DNase
- امکان مشاهده واکنش مثبت بهصورت ایجاد هاله شفاف پس از افزودن HCl یک نرمال
- امکان استفاده از Toluidine Blue با غلظت 0.1 گرم در لیتر بهعنوان روش جایگزین آشکارسازی فعالیت DNase
- قابل استفاده در بررسی فعالیت DNase گونههای Serratia
- عرضه بهصورت پودر دهیدراته همگن و روان
- مناسب برای آزمایشگاههای میکروبیولوژی بالینی و مراکز تحقیقاتی
ترکیبات محیط کشت DNase Test Agar
| ترکیب | مقدار در یک لیتر | نقش در محیط کشت |
|---|---|---|
| Tryptose | 20 گرم | تأمین مواد مغذی و ترکیبات ضروری برای رشد میکروارگانیسمها |
| Sodium Chloride | 5 گرم | حفظ تعادل اسمزی محیط |
| Deoxyribonucleic Acid (DNA) | 2 گرم | سوبسترای مورد نیاز برای شناسایی فعالیت آنزیم DNase |
| Agar | 15 گرم | عامل جامدکننده محیط کشت |
pH نهایی محیط در دمای 25 درجه سانتیگراد: 7.3 ± 0.2
کاربرد محیط کشت DNase Test Agar
| کاربرد | میکروارگانیسم یا گروه هدف | هدف استفاده |
|---|---|---|
| تشخیص فعالیت DNase | میکروارگانیسمهای DNase مثبت و منفی | بررسی توانایی تولید آنزیم دئوکسیریبونوکلئاز |
| شناسایی استافیلوکوکهای بیماریزا | Staphylococcus spp. | کمک به افتراق استافیلوکوکهای DNase مثبت از گونههای DNase منفی |
| شناسایی Staphylococcus aureus | Staphylococcus aureus | مشاهده واکنش مثبت DNase و استفاده بهعنوان آزمون تکمیلی شناسایی |
| افتراق گونههای استافیلوکوک | Staphylococcus aureus و Staphylococcus epidermidis | مقایسه واکنش مثبت و منفی DNase |
| بررسی Serratia | Serratia spp. | تشخیص فعالیت DNase و کمک به شناسایی برخی گونههای Serratia |
| افتراق باکتریهای گرم منفی | Serratia، Enterobacter و Klebsiella | کمک به افتراق Serratia از برخی باکتریهای مشابه با استفاده از معرف مناسب |
| آموزش و تحقیقات میکروبیولوژی | سویههای مختلف باکتریایی | بررسی تولید آنزیمهای خارج سلولی و فعالیت DNase |
اساس عملکرد محیط کشت DNase Test Agar
محیط کشت DNase Test Agar حاوی DNA است که بهعنوان سوبسترای آنزیم دئوکسیریبونوکلئاز عمل میکند. اگر میکروارگانیسم مورد آزمایش قادر به تولید و ترشح آنزیم DNase باشد، DNA موجود در اطراف محل رشد میکروارگانیسم هیدرولیز و به قطعات کوچکتر تبدیل میشود.
پس از پایان دوره انکوباسیون، سطح محیط کشت با اسید هیدروکلریک 1 نرمال (1 N HCl) پوشانده میشود. HCl باعث رسوب DNA هیدرولیزنشده و ایجاد کدورت در محیط میشود.
در اطراف کلنیهای DNase مثبت، DNA قبلاً توسط آنزیم تجزیه شده است و بنابراین با افزودن HCl رسوب ایجاد نمیشود. تشکیل یک هاله شفاف در اطراف محل رشد میکروارگانیسم نشاندهنده واکنش DNase مثبت است.
در مقابل، در میکروارگانیسمهای DNase منفی، DNA محیط تجزیه نمیشود و پس از افزودن HCl هاله شفافی در اطراف کلنیها مشاهده نخواهد شد.
بهعنوان روش جایگزین میتوان از Toluidine Blue استفاده کرد. طبق دیتاشیت ایبرسکو، افزودن تولوییدین بلو به میزان 0.1 گرم در لیتر به محیط میتواند جایگزین روش Flood کردن پلیت با HCl شود. همچنین معرفهایی مانند Crystal Violet و Methyl Green نیز برای آشکارسازی فعالیت DNase قابل استفاده هستند.
طریقه آمادهسازی محیط کشت DNase Test Agar ایبرسکو
برای تهیه یک لیتر محیط کشت:
مقدار 42 گرم از پودر محیط کشت DNase Test Agar ایبرسکو را وزن کنید.
پودر را در یک لیتر آب تصفیهشده (Purified Water) سوسپانسیون کنید.
محیط را بهطور کامل مخلوط کنید تا پودر بهصورت یکنواخت در آب پخش شود.
محیط تهیهشده را در دمای 121 درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه اتوکلاو کنید.
پس از استریلیزاسیون، اجازه دهید محیط تا دمای مناسب برای توزیع در ظروف استریل خنک شود.
محیط را در شرایط آسپتیک داخل پلیتهای استریل توزیع کنید و اجازه دهید کاملاً جامد شود.
پس از تلقیح میکروارگانیسم مورد بررسی، پلیتها را طبق دیتاشیت سازنده در دمای 35 ± 2 درجه سانتیگراد تا حداکثر 48 ساعت انکوبه کنید.
پس از پایان انکوباسیون، سطح پلیت را با اسید هیدروکلریک 1 نرمال (1 N HCl) بهآرامی Flood کنید.
تشکیل هاله شفاف در اطراف کلنیها نشاندهنده فعالیت مثبت DNase است.
روش جایگزین با Toluidine Blue
در صورت استفاده از روش تولوییدین بلو میتوان 0.1 گرم Toluidine Blue در هر لیتر محیط کشت اضافه کرد. در این روش نیازی به پوشاندن سطح پلیت با HCl پس از انکوباسیون نیست و فعالیت DNase با استفاده از تغییرات ایجادشده در اطراف محل رشد میکروارگانیسم بررسی میشود.
تفسیر نتایج آزمایش DNase
| نتیجه آزمایش | ظاهر محیط | تفسیر |
|---|---|---|
| DNase مثبت | ایجاد هاله شفاف اطراف کلنی پس از افزودن HCl | میکروارگانیسم قادر به تولید آنزیم DNase و هیدرولیز DNA است |
| DNase منفی | عدم تشکیل هاله شفاف اطراف کلنی | میکروارگانیسم قادر به هیدرولیز DNA موجود در محیط نیست |
کنترل کیفیت محیط کشت DNase Test Agar ایبرسکو
بر اساس دیتاشیت اختصاصی محصول، پاسخ کشت محیط پس از آمادهسازی و تلقیح سویههای کنترل، تا 48 ساعت انکوباسیون در دمای 35 ± 2 درجه سانتیگراد بررسی میشود.
| سویه کنترل کیفی | شماره ATCC | میزان رشد | واکنش DNase مورد انتظار |
|---|---|---|---|
| Serratia marcescens | 8100 | Good | مثبت (+) |
| Staphylococcus epidermidis | 12228 | Good | منفی (-) |
| Staphylococcus aureus | 25923 | Good | مثبت (+) |
پس از انکوباسیون، سطح پلیت با HCl یک نرمال پوشانده شده و تشکیل یا عدم تشکیل هاله شفاف در اطراف کلنیها بررسی میشود.
ظاهر محیط کشت
ظاهر پودر دهیدراته: پودر همگن، روان و به رنگ بژ روشن (Light-beige).
ظاهر محیط آمادهشده: محیطی به رنگ کهربایی روشن تا متوسط، کمی اپالسانس که ممکن است دارای مقدار اندکی رسوب باشد.
غلظت محلول مورد بررسی: 4.2 درصد.
pH در دمای 25 درجه سانتیگراد: 7.3 ± 0.2.
شرایط نگهداری
پودر دهیدراته محیط کشت DNase Test Agar ایبرسکو باید در ظرف اصلی، در محدوده دمایی 15 تا 30 درجه سانتیگراد نگهداری شود.
محیط کشت آمادهشده باید در دمای 2 تا 8 درجه سانتیگراد نگهداری شود.
برای حفظ کیفیت محصول، درب ظرف حاوی پودر پس از هر بار مصرف بهطور کامل بسته شود و از ورود رطوبت و آلودگی به داخل ظرف جلوگیری گردد.
