قبل از شروع آزمایش

1 ) قبل از شروع آزمايش اجازه داده شود تا معرفها به دماي اتاق (C ˚30-18 (برسند.

2 ) درصورت وجود كريستال در ويال شستشو قبل از انجام تست ، ويال را تا زمان حل شدن كريستالها در بن ماري C ˚37 قرار دهيد.

3 ) محتويات محلول شستشو ( يك ويال ml 50 ( را با آب مقطر، يا ديونيزه، در ظرف تميز به حجم ml 1000 برسانيد. (نسبت 1 به 19 رقيق شود)

4 ) در صورتي كه از دستگاه پليت ريدر با دو طول موج استفاده شود، نيازي به استفاده از چاهك بلانك نميباشد.

سه چاهك جهت كنترل منفي، دو چاهك جهت كنترل مثبت و يك چاهك جهت بلانك (در صورت نياز) و به تعداد لازم چاهك براي نمونه ها در نظر گرفته شود.

روش انجام آزمایش HIV ونتای

1) 100 لاندا از محلول كنترل منفي، مثبت و نمونه ها به تمامي چاهك ها اضافه شود (1- تمامي چاهك ها را با برچسب پليت بپوشانيد. 2- محتويات چاهكها با ضربه زدن آرام به پليت، مخلوط شوند.)

2) به مدت 30 دقیقه در 37 درجه سانتی گراد انکوبه شوند.

3) 300 لاندا از محلول شستشو آماده به تمامي چاهك ها اضافه شود. مراحل شستشو بايد 5 مرتبه همراه با سوك تايم تكرار شود.( دقت شود كه حتماً محلول شستشو تا 60 ثانيه درون چاهك ها باقي مانده و تخليه نشود.)

4) 100 لاندا از محلول كونژوگه HRP به تمامي چاهك ها اضافه شود (1 . نياز به افزودن معرف كونژوگه HRP به چاهك بلانك نمي باشد. 2) تمامي چاهك ها را با برچسب پليت بپوشانيد. 3) محتويات چاهك ها با ضربه زدن آرام به پليت، مخلوط شوند)

5) به مدت 30 دقیقه در 37 درجه سانتی گراد انکوبه شوند.

6) 300 لاندا از محلول شستشو آماده به تمامي چاهك ها اضافه شود. مراحل شستشو بايد 5 مرتبه همراه با سوك تايم تكرار شود.( دقت شود كه حتماً محلول شستشو تا 60 ثانيه درون چاهك ها باقي مانده و تخليه نشود.)

7) 50لاندا از کروموژن A به اضافه ی 50 لاندا از کروموژن B به تمامي چاهك ها اضافه شود (تمامي چاهك ها رابا برچسب پليت بپوشانيد.)

8) به مدت 15 دقیقه در 37 درجه سانتی گراد انکوبه شوند.

9) 50 لاندا از محلول متوقف كننده به تمامي چاهك ها اضافه شود.

10) جذب نوري چاهك ها را در طول موج 450nm و رفرانس 630nm قرائت نماييد.(چاهك ها حداكثر تا 10 دقيقه پس از متوقف كردن واكنش قرائت شود)